一、准备
在将灭菌器械放入灭菌器之前，请您先将其清洗干净，以避免灭菌器械上的残留物质对灭菌器本身以及灭菌器械产生危害。例如血迹以及其它杂质。
1）使用后需要灭菌的器械，应立即清洗灭菌器械上附着的残留物。推荐使用清洗机、净化剂和蒸馏水清洗灭菌器械。
2）清洗后，建议再用清水冲洗一遍，以确保其清洁。
3）在把器械放入灭菌提篮时，请将不同类别的器械分别放置在不同的提篮中，例如不锈钢、碳钢等，并且器械之间应留有适当的间隙。如果在提篮中盛放碳钢器械，在放置前，提篮上应当垫上若干层消毒纸或木棉纸，避免碳钢和不锈钢直接接触。
4）试管、玻璃瓶等的灭菌应使开口向下竖直放置，以便于置换冷空气和饱和蒸汽的进入。
5）在每一个提篮中放置一个灭菌指示卡。
6）每月一次，在负载中放置生物孢子检测指示剂，检测灭菌效果。
7）提篮不允许超载（12kg），否则将会引起不充分的灭菌和干燥。
8）灭菌时需包裹的器械应选用透气性好的包装材料，例如灭菌袋、灭菌纸、薄纱织物等。
9）试管玻璃瓶等的灭菌，应使开口向下竖直放置，以便于空气的排出和蒸汽的进入。
橡胶管灭菌前的准备工作如下：
请先用温水清洗橡胶管，然后将其放置在清洁的灭菌托盘上，同时确保管子是两头开口的空心管道，无任何急拐弯、扭曲、扭结等。
敷料包灭菌前的准备工作如下：
把敷料包垂直放在托盘上，避免与灭菌器内壁接触。
培养基灭菌前的准备工作：
仅限用耐热玻璃瓶，装载量不超过1/2容积，容器封口应使用透气性瓶塞。
二、升温
按启动键，灭菌器进入升温行程。
2.1升温指示灯亮（注意：必须高水位灯亮时才能加热）。
2.2上排数码管显示内室温度，下排数码管显示排冷气温度。
2.3电热管通电，内室开始升温。同时冷空气通过排汽阀排放。
2.4当内室温度到达设定的置换温度（即设置好的排冷气温度）时，排汽阀关闭，电热管继续加热。上排数码管显示内室温度，下排数码管显示灭菌时间的数值。
三、灭菌
当内室温度到达设定的灭菌温度时，开始灭菌计时，计时以秒为单位递减。
四、结束
当灭菌时间递减为0，转入结束。内室开始排汽，温度下降，当内室温度降至102℃，蜂鸣器鸣叫表示灭菌结束。压力表指针回复“0”位时，稍等一分钟，即可取出灭菌物品。
注意事项：
长时间灭菌一定保证不能发生漏气现象，一旦发生漏气现象锅体内的水份会逐渐减少，终可能导致烧干锅的情况，会发生危险。不漏气的情况下温度达到100度排气阀就会关闭，所以锅体内水份不会减少也就不会发生危险。所以，在使用过程中如果发生漏气现象需紧急切断电源，保证安全。
使用高压灭菌器不可不知下列的细节：
1、待灭菌的物品放置不宜过紧。
2、为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。
3、现在已有微电脑自控型高压蒸气灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
4、必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。
5、灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
6、装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
