VELP漩涡混匀器在染色体标本的FISH技术的应用

实验目的

　　1．掌握FISH技术的一般原理，及其基本实验方法；　

　　2．了解FISH技术的发展概况，以及应用范围。

实验原理

FISH是以分子杂交为基础，应用非放射性荧光物质标记核酸探针，通过碱基互补的原理与靶DNA杂交，在核中或染色体上显示靶DNA序列位置的方法。FISH技术可分为四个步骤：样品制备、探针标记、杂交及其检测。

实验准备

　　1．材料染色体标本或血涂片

　　2．仪器低温高速离心机、荧光显微镜、VELP漩涡混匀器、移液器、恒温水浴锅、培养箱、烤箱

实验方法与步骤　　

　　 1．探针混合与变性

　　（1）混合20～60ng标记探针DNA和3～5μg鲑精DNA。反应后体积少于10μl，可直接冻干；若体积较大，可加1/20体积的3mol/L乙酸钠和2倍体积100%乙醇沉淀DNA。混匀并于-70℃30min。在4℃，12000r/min离心10min，弃上清，沉淀物以300μl70%乙醇洗涤后在离心（同上），弃上清，冻干。

　　（2）将DNA重悬于5μl去离子的甲酰胺中，室温旋涡混匀3min。

　　（3）加入5μl杂交缓冲液，漩涡混匀器中混匀5min。

　　（4）将DNA探针置于75℃水浴中变性5min。迅速置于冰浴中5min，备用。　

　　 2．样本处理

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